金秋九月，又到了莘莘学子入学的时节，各种实验课题得紧锣密鼓安排上。作为一名经验丰富的技术支持，每年都会遇到大量常见的问题，本月我们先盘点三期同学们困惑的问题：工具类载体那么多，我怎么选合适的做实验呢？

常见的工具载体

市面上常见的，用于递送外源基因实现上调或者下调的工具包含：质粒、慢病毒（LV）、腺病毒（AD）、腺相关病毒（AAV），选对了合适的工具，是获得优质实验结果的重要保障，我们先来看下三种工具病毒的异同点：

我们先看看几种病毒的特点：

慢病毒：因潜伏期、致病期长而得名“慢”，基于HIV病毒来源的慢病毒，其包膜修改为水泡性口炎病毒的VSVG，以拥有针对众多细胞感染能力的特性。其最大特点是感染细胞谱系广，能够整合，做出稳转株，长期稳定表达；

腺病毒：因从腺体中分离而得名，为流感病毒特性，拥有针对大部分细胞高感染的特性，但病毒于细胞存在时间较短（细胞为一周，动物2~3周），适合短时间的高量表达。

腺相关病毒：其复制需要腺病毒的帮助而得名，特点是病毒颗粒极小，适合在动物致密的组织扩散，而且单位体积滴度很高，因此被广泛用于动物实验。但其表达基因的时间较长，且表达水平较低，动物实验需要的周期也较长。

质粒：环状质粒的特性类似腺病毒，都是DNA为遗传物质，表达水平高，且快，但质粒的转染细胞效率与腺病毒是天差地别的，仅对少部分肿瘤细胞或者工具细胞（293、Hela）有较好的递送效果，一般用于做验证类的实验，如双荧光素酶、CoIP等。

如何有效选择工具载体

谈了几种工具的异同点，下面我们谈谈如何有效选择工具载体：

考虑点：感染情况、基因大小、实验周期。三者综合考虑，如：

1.细胞实验周期很长，那么只能考虑用慢病毒做为递质，以稳转株（稳定表达外源基因的细胞株）进行后续实验。

2.若基因太大，超出病毒的包装极限，那只能选择质粒。但质粒递送效率低怎么办？那就使用电转、纳米材料等非常规手段递送。

3.若质粒、慢病毒均无法有效递送，可以试试腺病毒的感染效率（在不考虑慢病毒整合引发的细胞变化，一般细胞实验优先推荐慢病毒，既能感染众多细胞，又能满足长期实验，腺病毒在需要短时间高效表达的情况下，或者其他方式无法递送的情况下才会选择）。

4.质粒、腺病毒属于游离的DNA特性，表达水平高且快；慢病毒由于基因组整合进入染色体，表达水平是要低于前者一个层级的，这点也要考虑在内，对于高表达需求的，尽量使用腺病毒。

考虑点：注射部位、基因大小、实验周期、成本。

四者者综合考虑，如:

1.三种病毒，从滴度上排序：AAV>AD>LV，滴度越高，等于单位体积内含有的病毒量越多，最终能感染的细胞数就越多，这就是AAV大量用于动物实验的原因。一般注射分为两种方式：

A.系统性注射，如尾静脉、腹腔等，适合针对大型脏器或组织的递送（心、肝、血管、肌肉），三种病毒均可，但慢病毒的成本相对较高，在均可选择的情况下，尽量还是AAV。

B.原位注射，如脑立体、肝门静脉等，这种方式大多需要对动物进行手术，缺点是实验操作要求高，动物容易死亡，但非常节省病毒（约为系统性注射的五分之一），因此，几种病毒都是可以的。

2.常规推荐的AAV，由于总包装极限是4.7k（算上启动子、终止子、标记基因），能分配给基因的容量也就0~3k（要看具体启动子的大小）。若要特异性表达，而恰好对应的特异性启动子较大，超出包装极限，那么AAV就做不了，只能更换LV或者AD。当然，如果也超出后来者的极限，那就得尝试其他技术手段了。

3.慢病毒属于整合型病毒，只要感染，不管细胞分裂与否，都能长期表达；AD不整合，在细胞存在一段时间（2~3周）则会丢失，如果用腺病毒，则需要在病毒注射之后的2周左右，再补注射病毒；AAV虽然也不整合，但其会伴随染色体长期存在，适合在非分裂的细胞长期表达（>6个月），因此，实验周期的确认对应选择何种病毒。

4.表达时间上，AD（1~2天）>LV（3天）>AAV（3~4周），因此，想要快速表达的，就选择前两个。如造模之后只能维持一周，需要外源基因快速表达，那就只能舍弃AAV了。

以上就是小编盘点的常见工具病毒的特性以及使用注意事项。除上述提及的工具载体，吉凯基因还可提供更多优质基因操作工具，如悬浮细胞专用慢病毒、HSV病毒等，此外，还有大量的现货病毒、对照病毒、AAV试用装等，质优价廉，还在等什么，快来咨询吧！！！

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